

高岡智則
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サイズ排除クロマトグラフィーとは?
サイズ排除クロマトグラフィーは、分子の“大きさ”を手掛かりに混ざった物質を分離する方法です。主に生物学や化学の研究で使われ、タンパク質や多様な分子の純度を確認する際に役立ちます。
原理のしくみ
この方法では、多孔性の充填材(ビーズ)がカラムの中に詰められます。分子はこのビーズの隙間(孔)を通るとき、孔の大きさに応じて通過する経路が変わります。大きな分子ほど孔に入れずに表面を流れるため速く移動します。小さな分子は孔に入り込むため、長い経路をたどることになり、遅れて検出器に到達します。結果として“サイズの順”に分離されます。
ポイントと使いどころ
・形状や電荷の影響が少ないことが多く、比較的穏やかな条件で分離できます。
・分離の速度と分解能は充填材の性質に左右されます。
基本的な手順の概要
1. カラムに充填材を詰め、装填や平衡を行います。
2. 試料を注入し、ポンプで流します。
3. 検出器で分離後の成分を測定します。
実践での活用例
・タンパク質の分子量の概算、サイズに基づく分離、サンプルの分子量の推定など。
表で見る基本情報
| 特徴 | サイズ排除クロマトグラフィーの特徴は分子の大きさだけで分離する点です。 |
|---|---|
| 主な用途 | タンパク質のサイズ分離、分子量の推定、サンプルの純度確認 |
| メリット | 条件が穏やかで、形による影響が少ない場合が多い |
| デメリット | 分離の精度はビーズの孔径とサンプルの形状に左右される |
注意点
サイズ排除クロマトグラフィーは万能ではありません。分子の形状、凝集、アグリゲーション、溶媒の粘度などが結果に影響することがあります。実験計画では、試料の性質と充填材の特性を事前に調べ、比較的近いサイズレンジでの検証を行うことが重要です。
サイズ排除クロマトグラフィーの同意語
- サイズ排除クロマトグラフィー
- 分子の大きさ(サイズ)を基準に分離するクロマトグラフィーの一種。充填材として多孔ゲルを用い、大きな分子は孔を通過しにくく、小さな分子が充填材を透過して分離される。
- ゲル浸透クロマトグラフィー
- Gel permeation chromatography の日本語表現の一つ。ゲル状の充填材の孔による分離で、分子の大きさに応じて透過度が異なる仕組みを用いる。
- ゲル濾過クロマトグラフィー
- SECの別称のひとつ。ゲル状の充填材の孔を利用して分子の大きさで分離する手法。
- ゲルろ過クロマトグラフィー
- SECの表現の一つ。日本語の表記ゆれとして用いられることがある表現。
- 分子サイズ排除クロマトグラフィー
- 分子のサイズを理由に排除・透過を利用して分離する、SECと同じ原理のクロマトグラフィー。
- 分子量排除クロマトグラフィー
- 分子量の大小を基準に排除・透過を分離する、SECと同じ原理のクロマトグラフィー。
- サイズ選択クロマトグラフィー
- 分子のサイズを基準に選択的に分離するクロマトグラフィーの表現。
- サイズによる分離クロマトグラフィー
- 分子のサイズ差に基づいて分離するクロマトグラフィーの言い換え表現。
- 分子径排除クロマトグラフィー
- 分子の径(サイズ)に基づき排除・透過を利用する分離手法の一つ。
- 分子篩クロマトグラフィー
- 分子のサイズを篩のように使って分離することを表す日本語表現。
サイズ排除クロマトグラフィーの対義語・反対語
- イオン交換クロマトグラフィー
- 荷電を利用して分離する方法。溶質の電荷量や電荷の分布が分離の主因となり、サイズの大小ではなく電荷の性質で分離が決まる。
- アフィニティクロマトグラフィー
- 特定の結合相互作用を利用して標品を捕捉し、結合条件を調整して洗脱する分離法。サイズは主役ではなく、ターゲット分子と特異的な結合を持つものの有無が分離を決める。
- 逆相クロマトグラフィー
- 疎水性の差を利用して分離する方法。分子の疎水性が高いほど保持が強く、サイズとは独立した分離原理で分離される。
- ノーマルフェーズクロマトグラフィー
- 極性の違いを基に分離する方法。一般には極性差によって分離順が決まり、サイズ排除の原理とは異なる。
- 分配クロマトグラフィー
- 二相系の溶質の分配比の差を利用して分離する方法。溶質の分配係数の差によって分離が進むため、サイズではなく相互作用・溶解度の違いが主役。
- 相互作用ベースのクロマトグラフィー
- イオン交換・アフィニティ・分配・逆相など、サイズ以外の分子間相互作用を利用して分離する総称。サイズ排除とは別の原理で分離を行う点が特徴。
サイズ排除クロマトグラフィーの共起語
- ゲル浸透クロマトグラフィー
- SECの別称。高分子の分子量分布を評価するクロマトグラフィー手法。
- サイズ排除樹脂
- SECに特化して設計された多孔性樹脂。分子の大きさに基づいて分離します。
- ゲルビーズ
- SECのカラム充填材として用いられる多孔性ビーズ。
- 充填材
- カラムを満たす材料。ゲルビーズや樹脂などが主な充填材です。
- 分子量標準
- 分子量を既知とした標準物質。キャリブレーションに使います。
- ポリスチレン標準
- 分子量標準として広く使われるポリスチレン系の標準物質。
- 標準曲線
- 検出信号と既知分子量の関係を示す曲線。分子量の推定に用います。
- キャリブレーション
- 未知サンプルの分子量を推定するため、標準とデータを結びつける作業。
- 分子量分布
- 試料中の分子量の分布を表す指標。SECで評価します。
- 分子量範囲
- SECが有効な分子量のレンジ。
- 分離能
- 大きさで分子を分離する能力。
- 分解能
- 隣接するピークを分離できる程度。
- 保持時間
- 分析でサンプル分子がカラムに留まる時間。
- 溶出曲線
- 検出信号を溶出体積に対してプロットした曲線。
- 排除体積
- 大きい分子が早く溶出する際の体積領域。
- 溶出体積
- 分子サイズに応じて溶出する体積。
- カラム
- クロマトグラフィーの分析用カラム。
- カラム長
- カラムの長さ。測定性能に影響します。
- カラム径
- カラムの内径。流動挙動に関与します。
- ゲル充填材
- カラムをゲル状充填材で満たす構成要素。
- ゲルビーズ直径
- 充填ビーズの粒径。SECの分離特性に影響します。
- 粒径分布
- ビーズの粒径の分布。
- 移動相
- 分析時に用いる溶媒の組成。
- モバイル相
- 移動相と同義。流れを作る溶媒。
- 水系SEC
- 水を主溶媒として用いるSEC。
- 有機溶媒系SEC
- 有機溶媒を主溶媒として用いるSEC。
- 溶媒組成
- 溶媒の組成・割合。
- 温度制御
- カラム温度を安定させる管理。
- カラム温度
- カラムの温度。
- 流速
- カラム内の流れ速度。
- 流量
- 単位時間あたりの溶媒の体積。
- 検出法
- データを検出する方法。
- UV検出
- 波長設定でUV光を利用した検出。
- RI検出
- 屈折率で検出。
- MALS検出
- 多角度光散乱を用いた検出。分子量・形状情報を取得。
- 再現性
- 条件を再現しても結果が再現する安定性。
- スケールアップ
- 研究室規模から工業規模へ拡張する過程。
- 適用範囲
- SECが適用できる分子量・材料の範囲。
- 圧力
- カラム内の圧力。機器運用の目安。
- 保持時間分解能
- 保持時間の測定精度・分離分解能。
サイズ排除クロマトグラフィーの関連用語
- サイズ排除クロマトグラフィー
- 分子の大きさに基づいて分離を行うクロマトグラフィの一種。固定相は多孔質のゲルビーズで構成され、大きな分子は孔を通過できず早く洗い流され、小さな分子は多孔を通って長く滞留する。
- ゲルろ過クロマトグラフィー
- サイズ排除クロマトグラフィーの別表現。日本語では同義語として用いられることが多い。
- ゲル透過クロマトグラフィー(GPC)
- SECを英語名のGPCと呼ぶ表現。分子サイズを基準に分離する手法。
- 固定相
- 分離を実現するための固定物質。SECでは多孔質ゲルビーズが主な固定相となる。
- 移動相
- コラムを流す液体。SECでは一般に水系緩衝液を用い、pH・塩濃度を安定させる。
- ポアサイズ
- 固定相の孔径。分子が孔を通過できるかの判断基準であり、分離の基礎となる。
- 分子量カリブレーション
- 既知分子量の標準物質を用いて、エリュージョン体積と分子量の対応関係を作る作業。
- 標準物質
- デキストラン、プルランなど、分子量が既知の分子量標準物質を用いてカリブレーションを行う。
- カリブレーション曲線
- 分子量とエリュージョン体積の関係を表すグラフ。未知サンプルの分子量推定に使われる。
- 排除体積(Vo)
- 大きな分子が最初に排出されるコラム内の体積。Voは通常、コラムの“空隙体積”に対応する。
- エリュージョン体積(Ve)
- サンプルが検出器へ現れる体積。分子サイズに応じてVeは変化する。
- 固定相の材質(Sepharose系)
- タンパク質分離に広く用いられる多孔質ゲルビーズの代表。水和性が高く非特異吸着を抑えやすい。
- 固定相の材質(Sephadex系)
- ゲルろ過用のデキトラン系ビーズ。分子量標準としても使われることがある。
- 固定相の材質(Superdex系)
- 高分解能SEC用ゲルビーズ。中~大分子の分離に適する。
- 固定相の材質(Bio-Gel系)
- 経済的で汎用性の高いゲルビーズ系。実験用途や教育用にも利用される。
- 検出法(RI検出器)
- 屈折率の変化を検出してサンプル量を測る一般的な検出法。
- 検出法(UV検出)
- UV光の吸収を利用して信号を得る方法。タンパク質は特定波長で吸収が高いことが多い。
- 検出法(SEC-MALS)
- SECと多角度光散乱を組み合わせ、絶対分子量と分子量分布を推定できる検出系。
- 非特異吸着・相互作用の回避
- 固定相表面と試料分子の非特異的結合を避け、サイズベースの純粋な分離を目指す工夫が必要。
- モバイル相・バッファー条件
- pH、イオン強度、塩濃度など、分離の再現性と固定相の安定性に影響する条件の設計。
- 適用対象
- タンパク質、ポリマー、核酸など、サイズ差を利用して分離・推定を行うサンプルに適用される。



















